准备：LB 平板一块，50ml LB ， 冰， 离心管（50ml）2个， 枪头小离心管灭菌 ，0.05M cacl2 甘油 100ml: 0.735g cacl2  +  15ml 甘油 灭菌

 

1：LB 平板划线以得到单菌落

2：挑单菌于 5ml LB 中，37度，200rpm, 约4h, OD 0.4~0.6.目测就好

3：立即冰浴5min, 转到预冷的50ml管子中，4度 4000rpm  10min，弃上清，

4:加30ml cacl2甘油混合液， 4度 4000rpm  10min，弃上清

5：加2ml cacl2甘油混合液,冰浴5min

6:分装每管200微升，可-70度冰箱保存1个月